薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又稱(chēng)薄層層析，屬于固－液吸附色譜。是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種微量、快速而簡(jiǎn)單的色譜法，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，能快速鑒別植物提取物。

一、什么是薄層色譜？

薄層色譜法（TLC），系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點(diǎn)樣、展開(kāi)后，根據(jù)比移值（Rf）與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖的比移值（Rf）作對(duì)比，用以進(jìn)行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的方法。薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，也用于跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。

二、薄層色譜原理

薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對(duì)同一吸附劑吸附能力不同，使在流動(dòng)相（溶劑）流過(guò)固定相（吸附劑）的過(guò)程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達(dá)到各成分的互相分離的目的。

三、薄層色譜法發(fā)展歷史及現(xiàn)狀

1、薄層色譜在中藥分析中的簡(jiǎn)單回顧

自20世紀(jì)60年代薄層色譜取代紙色譜（紙層析）技術(shù)作為一種快速、簡(jiǎn)單、靈敏的鑒別手段應(yīng)用于中藥材及中成藥的鑒別，薄層掃描用于許多中藥及中成藥的含量測(cè)定，并收載于中國(guó)藥典以來(lái)，在控制中藥質(zhì)量方面起到積極的作用，已為中藥生產(chǎn)及質(zhì)量監(jiān)督管理部門(mén)所廣泛認(rèn)同。
    在早期的中國(guó)藥典的版本中，只有簡(jiǎn)單的化學(xué)顏色反應(yīng)和顯微鑒別，總灰分和含水量測(cè)量以及總浸出物測(cè)定，偶爾有總活性部位的含量測(cè)定，比如總生物堿，總黃酮，總皂苷等等。
薄層色譜法鑒別是在1985版中國(guó)藥典〔一部〕被**收載的，但由于受到當(dāng)時(shí)可獲得的化學(xué)對(duì)照品的缺乏故僅限于個(gè)別的專(zhuān)論中。實(shí)踐表明化學(xué)對(duì)照品的缺乏阻礙了TLC鑒別在草藥中應(yīng)用的拓展。甚至一些多數(shù)草藥共同含有的化學(xué)對(duì)照品對(duì)于質(zhì)量評(píng)價(jià)來(lái)說(shuō)是不太重要的。為了解決TLC鑒別中的瓶頸問(wèn)題，對(duì)照藥材(Reference Crude Drug; RCD)自1990版中國(guó)藥典起被引入了TLC鑒別項(xiàng)當(dāng)中。眾所周知，TLC的****的優(yōu)勢(shì)是能夠提供類(lèi)似圖畫(huà)的成像使得草藥中的成分組成能夠整體地被可視化。不同種屬的草藥產(chǎn)生的TLC圖像具有各自的專(zhuān)屬性。

2、薄層色譜在我國(guó)應(yīng)用的現(xiàn)狀

我們?cè)诩夹g(shù)上則一直滯留在初始階段的狀態(tài)，逐漸與其他發(fā)達(dá)國(guó)家拉開(kāi)了距離。

我國(guó)大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室依然使用實(shí)驗(yàn)室自制薄層板，同時(shí)多半使用的是簡(jiǎn)陋的器材，操作粗放，長(zhǎng)期處在“低水平，廣覆蓋”的狀態(tài)。

3、薄層色譜在其他國(guó)家藥典中的應(yīng)用

80年代后期雖然各國(guó)藥典逐漸傾向于應(yīng)用液相色譜技術(shù)，但在草藥分析領(lǐng)域，薄層色譜仍然廣泛地被應(yīng)用，尤其是歐洲國(guó)家。他們?cè)谄餍?、儀器、計(jì)算機(jī)化、自動(dòng)化等方面都有快速的發(fā)展。

歐洲國(guó)家草藥分析實(shí)驗(yàn)室已放棄了自制薄層板，均改用商品預(yù)制板，以避免因不同實(shí)驗(yàn)室自制的薄層板質(zhì)量不一致而結(jié)果互有差異。

4、05版藥典在薄層鑒別收載方面的特點(diǎn)

1）、在已有的薄層鑒別中，增加了專(zhuān)屬性更強(qiáng)的藥材作對(duì)照。與對(duì)照品相比，本版藥典更強(qiáng)調(diào)使用對(duì)照藥材做鑒別，以增加整體專(zhuān)屬性，新增的513個(gè)TLC鑒別中，使用對(duì)照藥材的占61.6%。

2）、增加對(duì)照品同時(shí)作對(duì)照，使鑒別更具針對(duì)性和專(zhuān)屬性對(duì)照品和對(duì)照藥材同時(shí)使用，增強(qiáng)專(zhuān)屬性，空白不得有干擾

3）、將有較好專(zhuān)屬性的成分替換專(zhuān)屬性不佳的成分

四、薄層色譜法（TLC）在植物提取物行業(yè)的應(yīng)用

1、植提原料、植物提取物及成品真?zhèn)舞b別

藥用植物的確定是薄層色譜*早的應(yīng)用領(lǐng)域，通過(guò)比較同一塊薄層板上的樣品和對(duì)照物的差異進(jìn)行判定。測(cè)試中樣品必須達(dá)到預(yù)先設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)，如數(shù)量、順序、位置和分離的條帶的顏色。對(duì)于植提原料，*簡(jiǎn)便的方法是并排比較一個(gè)植提原料（參照物）和另一個(gè)植提原料（樣品）的HPTLC指紋圖譜。這一過(guò)程**需要規(guī)定的是所確立的需要檢測(cè)樣品的檢測(cè)靈敏度，即樣品可以通過(guò)測(cè)試，而其它樣品如摻雜物無(wú)法通過(guò)。HPTLC指紋圖譜的*大價(jià)值主要在于色譜的視覺(jué)印象，如果用多次檢測(cè)可以進(jìn)一步擴(kuò)展，可以檢測(cè)及描述各組分的光譜而無(wú)須知道每一斑點(diǎn)色譜的化學(xué)特性。另一優(yōu)點(diǎn)是薄層色譜總是能夠看到所有的樣品，并且?guī)讉€(gè)樣品可以很容易的并排比較。對(duì)于原料、植物提取物及成品都可進(jìn)行鑒別。該方法也適用于復(fù)雜樣品如復(fù)方藥物。以西安銳博生物科技研發(fā)生產(chǎn)的紫錐菊提取物，紫錐菊多酚，菊苣酸為例。

圖為紫錐花屬根及常見(jiàn)偽品HPTLC色譜圖

從左到右分別為：紫錐菊、紫錐花、蒲草、狹葉紫錐菊、2E,4E,8Z,10E/Z-十二烷基四烯酸異丁基酰胺、 β-谷甾醇、蛇鞭菊、銀膠菊（2種不同樣品）。

2、穩(wěn)定性測(cè)試

藥用物質(zhì)及成品的穩(wěn)定性測(cè)試是HPTLC一個(gè)相當(dāng)新的應(yīng)用。在這一測(cè)試中需證明藥物在規(guī)定的儲(chǔ)藏條件下經(jīng)過(guò)一段時(shí)間不發(fā)生變化。另一方面，任何發(fā)生的變化需要能夠被檢測(cè)到。建立規(guī)定方法時(shí)通常對(duì)樣品采用強(qiáng)制降解，如光照、高溫、潮濕和水解等。采用HPTLC指紋圖譜進(jìn)行穩(wěn)定性測(cè)試需要方法穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)化、圖像文檔及現(xiàn)代化儀器設(shè)備可以**達(dá)到要求 。

3、標(biāo)示物定量

TLC在草藥分析中大多數(shù)的應(yīng)用是對(duì)標(biāo)示物進(jìn)行定量分析。由于分離能力的限制，對(duì)于草藥這樣復(fù)雜的樣品通常無(wú)法完全分離所有成分，所以大多數(shù)測(cè)定采用HPLC。然而人們常常忽視，實(shí)際上，只要有合適的儀器及方法，HPTLC達(dá)到定量分析的要求并不困難。HPTLC具有樣品處理簡(jiǎn)單，對(duì)特定的組分可采用特殊的優(yōu)化方法分離，可采用特殊的色譜前或色譜后衍生等優(yōu)點(diǎn)。但是，如果不作調(diào)整，大多數(shù)用于鑒別的指紋圖譜方法是不能用于定量分析的。以西安銳博生物科技研發(fā)生產(chǎn)的桑葉提取物，桑葉DNJ，桑葉黃酮為例。

五、西安銳博生物在產(chǎn)品質(zhì)量控制過(guò)程中也運(yùn)用到薄層色譜，下圖為桑葉黃酮在254nm和365nm波長(zhǎng)紫外光下觀察結(jié)果說(shuō)明不同波長(zhǎng)下產(chǎn)品和對(duì)照品斑點(diǎn)是相似的，證明西安銳博生物生產(chǎn)的桑葉提取物是正品。

西安銳博生物專(zhuān)注于植物提取物的研發(fā)與生產(chǎn)，核心產(chǎn)品有紫錐菊提取物，荷葉提取物，桑葉提取物，苦瓜提取物。歡迎查看我司原創(chuàng)的其他植物提取物技術(shù)文章。